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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒測(cè)定意義：SP(EC2.4.1.7) 要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷鍵，催化葡萄糖基轉(zhuǎn)移到果糖 木糖 半乳糖和鼠李糖等，合成相應(yīng)的葡萄糖基 聚糖 外，SP 還能催化氫/醌合成熊果苷，具有ji強(qiáng)的美白效果，在化妝品工業(yè)中具有重要應(yīng)用。
產(chǎn)品分類
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測(cè)定意義：
SP(EC2.4.1.7) 要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷鍵，催化葡萄糖基轉(zhuǎn)移到果糖 木糖 半乳糖和鼠李糖等，合成相應(yīng)的葡萄糖基 聚糖 外，SP 還能催化氫/醌合成熊果苷，具有ji強(qiáng)的美白效果，在化妝品工業(yè)中具有重要應(yīng)用
測(cè)定原理：
SP 能夠以磷酸體，催化蔗糖產(chǎn)生 1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸 酶催化6-磷酸葡萄糖，在 6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用還原 NADP+生成 NADPH，導(dǎo)340nm光吸收值增測(cè)定 340nm 吸光度增 速率，即可算SP活性
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平溫離心機(jī) 恒溫水浴鍋 紫外分光光度 /酶標(biāo)儀 微 石英比色皿/96 孔板和蒸餾水
試劑組成和配制：
提 液 液體 100mL×1 瓶，4℃保存
緩沖液 液體 10mL×1 瓶，4℃保存
試劑一 液體 5mL×1 瓶，4℃保存
試劑二 液體 1.5mL×1 支，4℃保存
試劑 液體 1mL×1 支，4℃保存
試劑四 粉劑 1 支，-20℃避光保存，臨用前 1mL 蒸水溶解
試劑五 粉劑 1 支，-20℃避光保存，臨用前 1mL 蒸水溶解
試劑 粉劑 1 支，-20℃避光保存，臨用前 2mL 蒸水溶解
試劑七 粉劑 1 支，-20℃避光保存，臨用前 2mL 蒸水溶解
粗酶液提?。?/span>
1. 組按照組質(zhì)g提液體 (mL) 15~10 的比例 建議約0.1g組，入1mL提液 進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 10min，清測(cè)
2. 菌真菌按照胞數(shù)104 個(gè)提液體mL500~10001 的比例建議500萬胞入1mL提液 ，冰浴超聲波破碎胞率300w，超聲 3 ，間隔7，總時(shí)間 3min然后10000g，4℃，離心 10min，清置于冰測(cè)
測(cè)定操作表：
1分光光度 /酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長 340nm 2、操作表
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | ||||||
緩沖液 µL | 85 | 65 | |||||
試劑一 µL | 50 | 50 | |||||
試劑二 µL | 3 | 3 | |||||
試劑 | µL | 2 | 2 | ||||
試劑四 µL | 10 | 10 | |||||
試劑五 µL | 10 | 10 | |||||
試劑 | µL | 20 | 20 | ||||
試劑七 µL | 20 | 20 | |||||
混勻，37℃水浴預(yù)熱 5min | ||
樣本 µL | 20 | |
迅速混勻，于微 石英比色皿/96 孔板，對(duì)照管調(diào)零，測(cè)定 340nm 的初始值 A1，測(cè)定完立即放入 37℃水浴準(zhǔn)確 應(yīng) 2min，對(duì)照管調(diào)零，迅速測(cè)定 340nm 吸光值 A2，△A= A2- A1 | ||
SP 活性計(jì)算公式：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式
1. 按照蛋白濃度 算
酶活定義 37℃，pH6.8 時(shí)， 毫克蛋白質(zhì) 分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 一個(gè)酶活單
SP 活性 nmol/min/mg prot = | ?A | 總÷V 樣÷Cpr÷T=804×△A÷Cpr | |
×V |
ε × d
2. 按照樣本質(zhì) 算
酶活定義 37℃，pH6.8 時(shí)，
克樣本 分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 一個(gè)酶活單
SP 活性 nmol/min/g 鮮重 = | ?A | 總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T=804×△A÷W | |
×V |
ε × d
3. 按照 胞數(shù)算
酶活定義 37℃，pH6.8 時(shí)， 104 個(gè) 胞 分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 一個(gè)酶活單
SP 活性 nmol/min/104 cell = | ?A | 總÷(V 樣÷V 樣總× | 胞數(shù) | 萬個(gè) )÷T=804×△ | |
×V |
ε × d
A÷ 胞數(shù) 萬個(gè)
ε NADPH 摩爾消光系數(shù)，6220 L/mol/cm d 比色皿光 ，1cm V
體 ，2mL V 樣 應(yīng)體系中樣本體 ，0.2mL W 樣本質(zhì) ，g Cpr
總 應(yīng)體系總
蛋白濃度，mg/mL
T 應(yīng)時(shí)間，2min
b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式
1. 按照蛋白濃度 算
酶活定義 37℃，pH6.8 時(shí)， 毫克蛋白質(zhì) 分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 一個(gè)酶活單
SP 活性 nmol/min/mg prot = | ?A | 總÷V 樣÷Cpr÷T=1608×△A÷Cpr | |
×V |
ε × d
3. 按照樣本質(zhì) 算
酶活定義 37℃，pH6.8 時(shí)，
克樣本 分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 一個(gè)酶活單
SP 活性 nmol/min/g 鮮重 = | ?A | 總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T=1608×△A÷W | |
×V |
ε × d
3. 按照 胞數(shù)算
酶活定義 37℃，pH6.8 時(shí)， 104 個(gè) 胞 分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 一個(gè)酶活單
SP 活性 nmol/min/104 cell = | ?A | 總÷(V 樣÷V 樣總× | 胞數(shù) | 萬個(gè) )÷T=1608× | |
×V |
ε × d
△A÷ 胞數(shù) 萬個(gè)
ε NADPH 摩爾消光系數(shù)，6220 L/mol/cm d 比色皿光 ，0.5cm V 總 應(yīng)體系總
體 ，2mL V 樣 應(yīng)體系中樣本體 ，0.2mL W 樣本質(zhì) ，g Cpr 蛋白濃度，mg/mL
T 應(yīng)時(shí)間，2min
注意事項(xiàng)：
1. 粉劑-20℃保存，配制好的試劑 3 天內(nèi)使用完
2. 可選用 BCA 法測(cè)定蛋白含 試劑盒測(cè)定蛋白含
蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒僅供科研！
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